Δοκιμή ζύμωσης λακτόζης

Δοκιμή ζύμωσης λακτόζης

Τι είναι η δοκιμή ζύμωσης λακτόζης; Αυτό το απλό τεστ προσδιορίζει μια ομάδα βακτηρίων που διασπούν τη λακτόζη. Το αν τα βακτήρια παράγουν λακτόζη ή όχι είναι συζητήσιμο. Το άγαρ TSI είναι το πιο κοινό πολιτιστικό μέσο που χρησιμοποιείται για το σκοπό αυτό. Άλλα κοινά μέσα καλλιέργειας που χρησιμοποιούνται για τη δοκιμή περιλαμβάνουν ζωμό κόκκινης ζάχαρης Φαινόλης και μέσο MacConkey. Αυτό το άρθρο εξετάζει κάθε έναν από αυτούς τους πολιτισμούς λεπτομερώς.

Άγαρ

TSI Η δοκιμή γλυκοζυλίωσης άγαρ TSI είναι μια δημοφιλής τεχνική που χρησιμοποιείται σε μικροβιολογικά εργαστήρια. Το άγαρ TSI αποτελείται από τρεις τύπους υδατανθράκων: γλυκόζη, λακτόζη και σακχαρόζη. Όλα ζυμώνονται από βακτήρια σε ένα εργαστήριο. Το προϊόν που θα προκύψει είτε θα γίνει λοξό είτε θα γίνει κίτρινο κατά τη διάρκεια της δοκιμής και θα περιέχει κόκκινο φαινόλης, το οποίο υποδηλώνει οξίνιση. Η δοκιμή μπορεί να χρησιμοποιηθεί ακόμη και για την ανίχνευση της παραγωγής υδρόθειου.

Το άγαρ TSI είναι ευαίσθητο στο pH. Το προκύπτον οξύ θα είναι ουδέτερο ή ελαφρώς αλκαλικό εάν η λακτόζη ζυμωθεί, ανάλογα με το είδος. Το pH του φυτού θα είναι επίσης ουδέτερο ή ελαφρώς αλκαλικό. Εάν το pH είναι πολύ υψηλό, τα βακτήρια μπορεί να παράγουν αμμωνία. Η πεπτόνη είναι ένα σημαντικό συστατικό του άγαρ TSI.

Το άγαρ TSI είναι ένα μέσο καλλιέργειας που περιέχει σακχαρόζη και γλυκόζη σε ποικίλες συγκεντρώσεις. Μετά από περίπου 48 ώρες, η λακτόζη και η γλυκόζη θα έχουν εξαντληθεί, ενώ το pH του μέσου θα επανέλθει στην κανονική του αλκαλική κατάσταση λόγω του μεταβολισμού της πεπτόνης. Ωστόσο, εάν οι οργανισμοί δεν έχουν τα ένζυμα για την αποικοδόμηση της γλυκόζης, η κλίση και ο πισινός θα παραμείνουν όξινα.

Ζωμός κόκκινης ζάχαρης

φαινόλης Η δοκιμή κόκκινης φαινόλης πραγματοποιείται με την προσθήκη διαλυτής βακτηριακής καλλιέργειας σε 100 ml ζωμού απεσταγμένου νερού. Αυτό είναι ένα κοινό μέσο ζύμωσης που περιέχει τρυπτικάση, χλωριούχο νάτριο και ζάχαρη. Ο ζωμός που προκύπτει έχει pH 9,5. Το χρώμα του αλλάζει από κόκκινο σε κίτρινο υπό όξινες συνθήκες, υποδηλώνοντας την παρουσία βακτηρίων. Το σημάδι μαχαιρώματος θα γίνει καθαρό εάν τα βακτήρια είναι μη κινητικά.

Όταν το βακτήριο παράγει ένα οξύ, θα διασπάσει οργανικές ενώσεις που είναι δύσπεπτες στο μικρόβιο. Το εύρος των ενώσεων εξαρτάται από τη συλλογή των ενζύμων που παράγονται από το είδος των βακτηρίων. Μία από αυτές τις ενώσεις είναι η λακτόζη. Εάν τα βακτήρια μπορούν να χρησιμοποιήσουν τη λακτόζη σε αυτή τη δοκιμή, θα παράγουν οξύ. Εάν η ένδειξη γίνει κίτρινη, τα βακτήρια χρησιμοποιούν λακτόζη.

Για να προσδιοριστεί εάν ένας οργανισμός μπορεί να χρησιμοποιήσει υδατάνθρακες, είναι σημαντικό να γνωρίζουμε το επίπεδο pH των μέσων που χρησιμοποιούνται στη δοκιμή. Η παρουσία μιας όξινης ουσίας (πυρουβικού οξέος) στο μέσο υποδηλώνει ότι ο οργανισμός ζυμώνει υδατάνθρακες. Το κόκκινο της φαινόλης είναι ένα κίτρινο χρώμα και υποδηλώνει ότι τα προϊόντα ζύμωσης έχουν φτάσει στο pH 6,8. Εάν δεν το κάνουν, τα βακτήρια δεν μπορούν να χρησιμοποιήσουν τους υδατάνθρακες.

TSI άγαρ slants Το

TSI agar slant είναι ένα δημοφιλές μέσο δοκιμών που χρησιμοποιείται για τη μέτρηση της παραγωγής υδρόθειου και αερίων από ζύμωση υδατανθράκων. Περιέχει τρεις υδατάνθρακες, πεπτόνες και ερυθρό φαινόλης (δείκτης pH). Η αντίδραση μεταξύ των σακχάρων και των οξέων έχει ως αποτέλεσμα κίτρινο χρώμα στον δοκιμαστικό σωλήνα. Ανάλογα με το είδος, τα αποτελέσματα αναφέρονται ως «Α» για το οξύ ή «Β» για τον πισινό.

Η κλίση άγαρ TSI για τη δοκιμή ζύμωσης λακτόζης περιέχει τρεις τύπους ζάχαρης. Η γλυκόζη και η σακχαρόζη μπορούν και οι δύο να ζυμωθούν. Στην τελευταία περίπτωση, το οξύ που παράγεται από τα βακτήρια θα παράγει υδρόθειο. Το οξύ στο μέσο δοκιμής θα εμφανιστεί με τη μορφή φυσαλίδων ή ρωγμών. Επιπλέον, το υδρόθειο μπορεί να παραχθεί από οργανισμούς που επιτίθενται στη λακτόζη και τη σακχαρόζη. Αυτό είναι σημάδι ότι ένας οργανισμός τα ζυμώνει.

Το pH της αντίδρασης μπορεί να μετρηθεί αναζητώντας ρωγμές ή φυσαλίδες. Οι πλάκες άγαρ TSI κατασκευάζονται με θειοθειικό νάτριο και θειικό σίδηρο. Οι δύο ουσίες αντιδρούν για να δημιουργήσουν υδρόθειο και μπορεί να καλύψει την οξύτητα που έχει εμφανιστεί στο κάτω μέρος του μέσου.

Μέσο

MacConkey Η πλάκα άγαρ MacConkey καθορίζει εάν μια καλλιέργεια περιέχει βακτήρια LF ή μη-LF βακτήρια. Περιέχει χολικά άλατα, τα οποία αναστέλλουν τα περισσότερα θετικά κατά Gram βακτήρια, βαφή κρυσταλλικής βιολέτας και λακτόζη. Η λακτόζη είναι η πηγή υδατανθράκων για τα βακτήρια που ζυμώνουν τη λακτόζη. Όταν η λακτόζη ζυμωθεί, το χρώμα της αποικίας θα γίνει ροζ, με ένα ροζ φωτοστέφανο γύρω από την ανάπτυξη.

Ένα αρνητικό αποτέλεσμα δοκιμής για ζύμωση λακτόζης υποδεικνύει ότι τα κολοβακτηρίδια (όχι τα βακτήρια που ζυμώνουν λακτόζη) δεν μπορούν να ζυμώσουν τη ζάχαρη. Κατά συνέπεια, τα βακτήρια είναι μη κολοβακτηρίδια και πιθανά παθογόνα. Τα μη κολοβακτηρίδια δεν ζυμώνουν τη λακτόζη και δεν βρίσκονται στο ανθρώπινο έντερο. Το μέσο άγαρ MacConkey είναι διαφορικό και επιλεκτικό, επομένως η δοκιμή είναι χρήσιμη για τον προσδιορισμό του εάν ένα συγκεκριμένο βακτήριο ευθύνεται για τη μόλυνση από μαστίτιδα.

Για να ελέγξετε για ζύμωση λακτόζης, πρέπει να βεβαιωθείτε ότι τα βακτήρια παράγουν πυροσταφυλικό. Επιπλέον, εάν τα βακτήρια παράγουν πυροσταφυλικό, έχουν ήδη αρχίσει να παράγουν απόβλητα αλκοόλης. Επομένως, ένα θετικό τεστ για αυτό το βακτήριο δείχνει ότι η καλλιέργεια παράγει βουτανοδιόλη. Οι VP-A και VP-B προστίθενται στο μέσο καλλιέργειας μετά την ανάπτυξη βακτηρίων. Τα αποτελέσματα αναφέρονται σε χρωματολόγιο.

Στελέχη Salmonella

Η εμφάνιση των αποικιών Lac+Salmonella είναι παρόμοια με εκείνες του E. coli. Τα περισσότερα στελέχη παράγουν μια αλκαλική κλίση στο Τριπλό Ζάχαρο Σιδήρου Άγαρ (TSIA). Οι πιο κοινές απομονώσεις παράγουν αέριο και H2S, ενώ το S. Typhi δεν παράγει αέριο, αλλά τα ίχνη H2S είναι ορατά στη θέση μαχαιρώματος. Μια τυπική καλλιέργεια άγαρ Levine EMB των στελεχών Lac+Salmonella είναι μια μικρή, τραχιά πούλια 2 έως 4 mm.

Η μολυσματικότητα των στελεχών της Salmonella είναι πολύπλοκη και πιθανώς οφείλεται στη δυναμική πηγής-βύθισης. Μερικά στελέχη Salmonella είναι ιδιαίτερα ειδικά για τον ξενιστή, ενώ άλλα είναι παμφάγα, με δεξαμενές σε ανθρώπους, πουλερικά και χοίρους. Επιπλέον, ορισμένα στελέχη μπορούν να αποικίσουν τα αναπαραγωγικά όργανα ενός πτηνού, επιτρέποντας στον οργανισμό να μολύνει τα αναπτυσσόμενα αυγά.

Χρησιμοποιώντας την τεχνική MALDI-TOF MS, τα στελέχη της Salmonella typhimurium μπορούν να αναγνωριστούν από τα βιοχημικά χαρακτηριστικά τους. Οι θετικοί και οι αρνητικοί μάρτυρες επιβεβαιώνουν τις απομονώσεις των στελεχών Salmonella. Όλες οι δοκιμές πρέπει να καταγράφονται για σκοπούς ελέγχου. Το όργανο Vitek MS περιλαμβάνει επίσης έναν εσωτερικό έλεγχο E. coli σε κάθε διαφάνεια. Οι προκύπτουσες αλληλουχίες στη συνέχεια συγκρίνονται με τα στελέχη Salmonella, επιτρέποντας περαιτέρω σύγκριση.

MAC

Η δοκιμή ζύμωσης λακτόζης MAC είναι μια μέθοδος που χρησιμοποιείται για να προσδιοριστεί εάν ένα βακτηριακό στέλεχος ζυμώνει τη λακτόζη. Τα βακτήρια που παράγουν ροζ-κόκκινες αποικίες στο άγαρ MacConkey είναι συνήθως αποτέλεσμα του Escherichia coli ή του Klebsiella spp. Άλλα μη ζυμωτικά περιλαμβάνουν τα Morganella, Psudomonas, Providencia και Shigella.

Η μέθοδος άγαρ MacConkey αναπτύχθηκε αρχικά για τη μελέτη της μικροβιολογίας του νερού. Οι περιορισμοί του κατέστησαν δύσκολη την αξιολόγηση της ζύμωσης της λακτόζης, καθώς δεν παρήγαγε αρκετό οξύ για την κατακρήμνιση της χολής. Αλλά ο Albert Grunbaum και ο Edward Hume τροποποίησαν τη μέθοδο προσθέτοντας ουδέτερο κόκκινο, το οποίο αλλάζει χρώμα από κίτρινο σε κόκκινο σε βασικό pH. Αυτή η μέθοδος επιτρέπει μεγαλύτερη ευαισθησία. Για περισσότερες πληροφορίες, επισκεφθείτε την ιστοσελίδα δοκιμής ζύμωσης λακτόζης MAC.

Η δοκιμή ζύμωσης λακτόζης MAC χρησιμοποιεί το μέσο LB, ένα άγαρ με βάση θρεπτικά συστατικά. Περιέχει χολικά άλατα και είναι επιλεκτικό για Gram-αρνητικά βακτήρια. Μπορεί να διακρίνει μεταξύ Escherichia coli και Shigella. Επιπλέον, μπορεί να διαφοροποιήσει τη Salmonella spp., η οποία παράγει υδρόθειο. Για το λόγο αυτό, είναι απαραίτητο να επιλέξετε το είδος πριν από τη διενέργεια δοκιμής ζύμωσης λακτόζης MAC.

Αποτελέσματα μιας δοκιμής ζύμωσης

λακτόζης Η δοκιμή ζύμωσης λακτόζης καθορίζει εάν ένα στέλεχος βακτηρίων μπορεί να ζυμώσει τη λακτόζη. Η δοκιμή χρησιμοποιεί ένα μέσο που περιέχει λακτόζη, εκχύλισμα ζύμης, K2HPO4 και MnSO4. Το επίπεδο pH του μέσου μετριέται χρησιμοποιώντας έναν δείκτη που ονομάζεται ερυθρό του μεθυλίου. Επιπλέον, η κόκκινη φαινόλη αλλάζει χρώμα από κόκκινο-πορτοκαλί σε βαθύ κόκκινο κατά την αλκαλοποίηση.

Ένα θετικό αποτέλεσμα δείχνει ότι τα βακτήρια παρήγαγαν λακτάση και το ένζυμο κυστεΐνη δεσουλφυδράση. Από την άλλη πλευρά, ένα αρνητικό αποτέλεσμα σημαίνει ότι τα βακτήρια δεν παρήγαγαν κανένα από αυτά τα ένζυμα. Αυτό οφείλεται στο γεγονός ότι δεν παρήχθησαν φυσαλίδες αερίου κατά τη διάρκεια της δοκιμής. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα δείχνει ότι τα βακτήρια δεν παρήγαγαν λακτάση ή σακχαρόζη. Εάν τα αποτελέσματα του τεστ είναι αρνητικά, καλό είναι να σταματήσετε αμέσως τον έλεγχο.

Το μέσο καλλιέργειας είναι ένας θρεπτικός ζωμός με 0,5 έως 1 τοις εκατό λακτόζη. Το μέσο περιέχει κόκκινο φαινόλης, δείκτη pH που γίνεται κόκκινο σε ουδέτερα επίπεδα pH και γίνεται κίτρινο και ματζέντα σε επίπεδα pH πάνω από 8,4. Εάν το μέσο καλλιέργειας δείξει θετικό αποτέλεσμα, είναι πολύ πιθανό τα βακτήρια να μπορούν να ζυμώσουν τη λακτόζη. Εάν η καλλιέργεια δεν παράγει λακτάση, το μέσο ανάπτυξης δεν είναι σε θέση να ζυμώσει τη λακτόζη.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *