Gram αρνητικές ράβδοι χωρίς ζύμωση λακτόζης

Gram αρνητικές ράβδοι και βακτήρια που ζυμώνουν μη λακτόζη

ζύμωσης μη λακτόζης Οι γραμ-αρνητικές ράβδοι που ζυμώνουν γρήγορα τη λακτόζη έχουν γενικά διακριθεί με βάση τη μορφολογία της αποικίας, τις παραμέτρους IMViC και το υδρόθειο. Ωστόσο, μια μελέτη που διεξήχθη το 2011 συνέκρινε την κινητικότητα του υδρόθειου και του παχέος εντέρου για να προσδιοριστεί η σχετική συχνότητα των αρνητικών κατά Gram ράβδων που ζυμώνουν τη λακτόζη.

Άγαρ MacConkey

Οι Gram-αρνητικές ράβδοι και τα βακτήρια αναπτύσσονται στο ίδιο άγαρ που ονομάζεται άγαρ MacConkey. Ωστόσο, τα βακτήρια στην ίδια καλλιέργεια δεν αναπτύσσονται πάντα μαζί. Αυτό συμβαίνει επειδή το υλικό περιέχει τόσο λακτόζη όσο και χολικά άλατα, τα οποία είναι απαραίτητα θρεπτικά συστατικά για την ανάπτυξη μικροοργανισμών. Τα βακτήρια που ζυμώνουν λακτόζη έχουν σκούρο ροζ ή κόκκινο χρώμα και τα βακτήρια που δεν ζυμώνουν λακτόζη είναι άχρωμα.

Τα βακτήρια στην καλλιέργεια άγαρ δεν είναι απαραίτητα παθογόνα, αλλά η παρουσία τους στο άγαρ είναι ένδειξη ότι ο οργανισμός είναι κοπράνων. Αυτοί οι οργανισμοί υπάρχουν στο γαστρεντερικό σωλήνα των ανθρώπων, άλλων θηλαστικών, ερπετών, πτηνών και ψαριών. Ωστόσο, δεν προκαλούν πάντα ασθένειες και μπορεί να υποδηλώνουν ότι άλλα παθογόνα των κοπράνων μολύνουν τα τρόφιμα.

Άλλα βακτήρια μπορούν να αναπτυχθούν στο άγαρ MacConkey, συμπεριλαμβανομένου του Haemophilus spp. Αυτά τα βακτήρια μπορούν να προκαλέσουν μηνιγγίτιδα και επεμβατικές λοιμώξεις στην ανώτερη αναπνευστική οδό. Ευτυχώς, ένα εμβόλιο κατά του H. influenza τύπου Β έχει μειώσει σημαντικά τη θνησιμότητα από τη νόσο. Αυτά τα βακτήρια είναι επίσης γνωστό ότι προκαλούν γεννητικά έλκη και chancroids. Αν και τα βακτήρια δεν αναπτύσσονται στο BAP, αυτοί οι οργανισμοί μπορούν να προκαλέσουν γαστρεντερίτιδα και εντεροκολίτιδα.

Το άγαρ MacConkey υποστηρίζει την ανάπτυξη αρνητικών κατά Gram βακτηρίων.

Τα εκλεκτικά βακτηριακά μέσα ανάπτυξης (SBM) υποστηρίζουν μόνο την ανάπτυξη του οργανισμού ενδιαφέροντος και περιορίζουν την ανάπτυξη άλλων τύπων. Το άγαρ MacConkey είναι ένα παράδειγμα τέτοιου μέσου επειδή περιέχει κρυσταλλική βιολέτα και χολικά άλατα, τα οποία αναστέλλουν την ανάπτυξη των θετικών κατά Gram βακτηρίων και ευνοούν τα αρνητικά κατά gram βακτήρια. Αυτό το εκλεκτικό άγαρ είναι επίσης γνωστό ως διαφορικό μέσο επειδή περιέχει έναν δείκτη pH, ο οποίος γίνεται ουδέτερος κόκκινος όταν το pH του δείγματος πέσει κάτω από ένα ορισμένο σημείο.

Το άγαρ MacConkey περιέχει τέσσερα βασικά συστατικά: κρυσταλλική βιολέτα, χολικά άλατα και λακτόζη. Η παρουσία αυτών των συστατικών βοηθά στη διάκριση μεταξύ στελεχών βακτηρίων. Τα βακτήρια ζυμώνουν Η λακτόζη θα σχηματίσει ροζ-κόκκινες αποικίες και το επίπεδο του pH θα πέσει σε ουδέτερο κόκκινο. Τα μη ζυμωτικά, ωστόσο, δεν μπορούν να χρησιμοποιήσουν τη λακτόζη και έτσι εμφανίζονται άχρωμα.

Το άγαρ αίματος υποστηρίζει την ανάπτυξη των περισσότερων κλινικά σημαντικών μικροοργανισμών. Η πλάκα άγαρ MacConkey, από την άλλη πλευρά, επιτρέπει τη διαφοροποίηση μεταξύ διαφορετικών ειδών βακτηρίων. Αυτό το υλικό περιέχει επίσης χολικά άλατα και λακτόζη για την αναστολή της ανάπτυξης θετικών κατά Gram βακτηρίων. Το άγαρ MacConkey υποστηρίζει την ανάπτυξη αρνητικών κατά Gram βακτηρίων και επιτρέπει τη διαφοροποίηση μεταξύ τους.

Τα χολικά άλατα αναστέλλουν τα θετικά κατά Gram βακτήρια.

Τα χολικά άλατα είναι μια κατηγορία αντιμικροβιακών ενώσεων και είναι απαραίτητα για την έμφυτη ανοσολογική απόκριση του ανθρώπινου πεπτικού συστήματος. Η παρουσία τους στο έντερο είναι σημαντική για τον προσδιορισμό της μικροβιακής οικολογίας της οδού. Ωστόσο, τα μεταβαλλόμενα επίπεδα χολικών αλάτων στο σώμα μπορεί να ενθαρρύνουν τον αποικισμό παθογόνων μικροοργανισμών. Κατά συνέπεια, τα χολικά άλατα είναι χρήσιμα για τη θεραπεία φλεγμονωδών ασθενειών και την επίλυση της δυσλειτουργίας της χοληδόχου κύστης.

Τα βακτήρια που είναι ευαίσθητα στα χολικά άλατα βασίζονται σε τρεις στρατηγικές για να επιβιώσουν στις φυσιολογικές συγκεντρώσεις των χολικών αλάτων. Πρέπει να αποτρέψουν τη συσσώρευση πρωτεϊνών υπό συνθήκες δισουλφιδικού στρες, να μειώσουν το οξειδωμένο GSSG και να αποκαταστήσουν την οξειδοαναγωγική ομοιόσταση. Ως εκ τούτου, παρουσία χολικών αλάτων, αυτά τα βακτήρια εμφανίζουν αυξημένη ευαισθησία οξειδοαναγωγής. Εκτός από τα χολικά άλατα, το HOCl, ένα δραστικό συστατικό στο οικιακό λευκαντικό, είναι ένας φυσιολογικός αντιμικροβιακός παράγοντας.

Ο μηχανισμός με τον οποίο τα χολικά άλατα αναστέλλουν τα θετικά κατά Gram βακτήρια δεν είναι γνωστός. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι τα χολικά άλατα προκαλούν εκτεταμένη συσσώρευση πρωτεϊνών in vivo. Ωστόσο, αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι τα χολικά άλατα επηρεάζουν τους ίδιους τύπους βακτηρίων. Για παράδειγμα, τα άλατα χολής είναι πιο αποτελεσματικά έναντι των παθογόνων βακτηρίων από τα κοινά βακτήρια. Αυτό συμβαίνει επειδή έχουν μια διπλή λειτουργία ενίσχυσης της απορρόφησης τροφής.

Σωλήνας γλυκόζης

Κατά την καλλιέργεια μικροοργανισμών, μπορούν να χρησιμοποιήσουν διάφορες τεχνικές για να καθορίσουν το επίπεδο της ζύμωσης της λακτόζης τους. Μία από αυτές τις μεθόδους περιλαμβάνει την επώαση της γλυκόζης με έναν συγκεκριμένο οργανισμό. Αυτοί οι οργανισμοί μπορούν να παράγουν διαφορετικούς τύπους σακχάρων. Σε αυτή την περίπτωση, ο οργανισμός είναι ικανός να παράγει Λακτόζη και σακχαρόζη. Αυτοί οι οργανισμοί παράγουν επίσης ένζυμα όπως η λακτάση και η σακχαράση. Το αποτέλεσμα της δοκιμής είναι η παραγωγή λακτόζης καθώς τα κύτταρα ζυμώνουν τη γλυκόζη.

Επιπλέον, πολλά εντερικά βακτήρια, συμπεριλαμβανομένου του E. coli, ταξινομούνται στην οικογένεια Enterobacteriaceae, ικανά να ζυμώνουν τη γλυκόζη. Η πρόσφατη ταυτοποίηση παθογόνων στελεχών του. Το Coli οδήγησε σε περισσότερη έρευνα για την πιθανή παθογένεια αυτών των οργανισμών. Τα βακτήρια που προκαλούν υδαρή διάρροια και πυρετό σχετίζονται κυρίως με βρέφη και μικρά παιδιά.

Όταν τα βακτήρια στο μέσο καλλιέργειας είναι ικανά για ζύμωση λακτόζης, οι πλάγιες και οι άκρες των καλλιεργειών θα χρωματιστούν κίτρινο. Αυτό το χρώμα δείχνει ότι οι οργανισμοί μπορούν να ζυμώσουν τη λακτόζη και τη σακχαρόζη. Οι άχρωμες αποικίες των οργανισμών ζύμωσης λακτόζης αναγνωρίζονται εύκολα αναζητώντας ρωγμές στο κάτω μέρος του μέσου καλλιέργειας.

Αντίδραση Voges-Proskauer

Η τροποποίηση Coblenz της αντίδρασης Voges-Proskauer είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη δοκιμή για να προσδιοριστεί εάν οι αρνητικές κατά gram ράβδοι ζυμώνουν λακτόζη ή όχι. Καλλιέργειες που έχουν αναπτυχθεί σε άγαρ αίματος μεταφέρονται στον ζωμό Voges-Proskauer, ο οποίος επωάζεται όλη τη νύχτα ή για έξι ώρες. Για να ελεγχθεί για ακετυλομεθυλοκαρβινόλη, δέκα σταγόνες διαλύματος Α ή Β προστίθενται σε 0,5 ml καλλιέργειας. Μέσα σε 30 λεπτά, εμφανίζεται ένα κόκκινο χρώμα, ενώ ένα ροζ ή χρώμα σκουριάς ερμηνεύεται ως ασθενώς θετική αντίδραση.

Η δοκιμή ερυθρού μεθυλίου είναι ένας απλός τρόπος για να προσδιορίσουμε εάν τα βακτήρια στα τρόφιμα που καταναλώνουμε ζυμώνουν τη λακτόζη ή όχι. Τα βακτήρια που παράγουν αυτή την αντίδραση είναι gram-αρνητικές ράβδοι που ζυμώνουν τη λακτόζη. Παράγουν επίσης ουρία και χολικά οξέα και μπορούν να χρησιμοποιούν κιτρικό ως μοναδική πηγή άνθρακα.

Η αντίδραση Voges-Proskauer σε μια σειρά από Gram-αρνητικά βακτήρια είναι χρήσιμη για την αναγνώριση ειδών Lactobacillus. Οι γαλακτοβάκιλλοι που είναι αρνητικοί στην οξειδάση μπορεί να είναι δύσκολο να αναγνωριστούν και το Enterotube II αναπτύχθηκε ειδικά για αυτόν τον σκοπό. Και τα δύο είναι εύκολα στη χρήση, αλλά το Oxi/Ferm Tube είναι πιο ευαίσθητο και βολικό. Το Enterotube II έχει τα μειονεκτήματα ότι είναι δύσκολο να στοιβάζεται σε θερμοκοιτίδα και μικρή διάρκεια ζωής.

Αντίδραση ερυθρού μεθυλίου Η αντίδραση ερυθρού

μεθυλίου σε καλλιέργεια αρνητικών κατά Gram ραβδίων είναι μια χρήσιμη δοκιμή για τον εντοπισμό των βακτηρίων που είναι υπεύθυνα για την παραγωγή Λακτόζης. Το τεστ έχει δύο περιορισμούς. Πρώτον, μπορεί να αποτύχει να ανιχνεύσει ορισμένα στελέχη βακτηρίων, ενώ μπορεί να μην ανιχνεύσει άλλα. Δεύτερον, η καλλιέργεια πρέπει να επωάζεται σε σταθερή θερμοκρασία 35°C για 48 ώρες. Η δοκιμή ερυθρού μεθυλίου απαιτεί περίοδο επώασης 48 ωρών. Εάν δεν αφήσετε την καλλιέργεια να αναπτυχθεί, τα αποτελέσματα θα είναι άκυρα.

Η αντίδραση του ερυθρού μεθυλίου σε μια καλλιέργεια αρνητικών κατά Gram ράβδων μπορεί να βοηθήσει στον εντοπισμό ορισμένων παθογόνων στελεχών βακτηρίων. Αυτή η δοκιμή λειτουργεί με την προσθήκη ενός δείκτη που ονομάζεται ερυθρό του μεθυλίου στον εμβολιασμένο σωλήνα. Εάν οι οργανισμοί παράγουν όξινα τελικά προϊόντα, το κόκκινο του μεθυλίου θα παραμείνει κόκκινο. Το κόκκινο του μεθυλίου θα παραμείνει πράσινο εάν οι οργανισμοί δεν παράγουν όξινα τελικά προϊόντα.

Οι καλλιέργειες που δεν παράγουν ζύμωση λακτόζης είναι γνωστές ως «ζυμωτές μη λακτόζης». Οι συγγραφείς χρησιμοποίησαν αποστειρωμένα κόπρανα και 10 τοις εκατό χολή για να απομονώσουν τα βακτήρια σε αυτή τη μελέτη. Η λακτόζη δεν χρησιμοποιήθηκε όταν τα στελέχη αναπτύχθηκαν σε αυτές τις συνθήκες έως ότου ήταν εμφανής η παραγωγή οξέος. Αυτό καθιστά αδύνατη τη διάκριση μεταξύ αυτών των στελεχών με τη χρήση διαγνωστικών ορών.

Το κιτρικό είναι η μοναδική πηγή άνθρακα.

Αυτό το τεστ μετρά την ικανότητα ενός μικροοργανισμού να χρησιμοποιεί κιτρικό άλας ως μοναδική πηγή άνθρακα, το οποίο μπορεί να είναι χρήσιμο για τη διάγνωση ορισμένων παθήσεων και την ανάπτυξη ανθεκτικών στα αντιβιοτικά βακτηρίων. Το κιτρικό είναι μια απλή, φθηνή πηγή άνθρακα που μπορούν να χρησιμοποιήσουν οι μικροοργανισμοί για να αναπτυχθούν αερόβια παρουσία φωσφορικού αμμωνίου ή νιτρικού αμμωνίου. Το κιτρικό μέσο περιέχει κιτρικό νάτριο, νιτρικό αμμώνιο, νιτρικό κάλιο και μπλε βρωμοθυμόλης, δείκτη pH.

Εάν ένας οργανισμός μπορεί να χρησιμοποιήσει κιτρικό ως μοναδική πηγή άνθρακα, ονομάζεται κιτρική-περμεάση. Χρησιμοποιεί κιτρικό για να μεταβολίσει την αμμωνία και παράγει υδροξείδιο του αμμωνίου. Το χρώμα αλλάζει από πράσινο σε μπλε με την προσθήκη κιτρικού, υποδεικνύοντας ότι ο οργανισμός μπορεί να χρησιμοποιήσει το κιτρικό ως μοναδική πηγή άνθρακα.

Η παρουσία αυτών των καλλιεργειών προσδιορίστηκε αρχικά στα κόπρανα των χειριστών υγιεινών τροφίμων. Στη συνέχεια, μεταφέρθηκαν διαδοχικά σε άγαρ που περιείχε 1 τοις εκατό λακτόζη. Η καλλιέργεια έδειξε αντίδραση τύπου κόλον όταν επιστρώθηκε σε άγαρ ηωσίνης-μεθυλενίου-μπλε. Αυτά τα βακτήρια μπορούν επίσης να χρησιμοποιήσουν άλλες πηγές άνθρακα, όπως το φωσφορικό οξύ.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *